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內(nèi)切酶作用及識(shí)別序列結(jié)構(gòu)情況概述

發(fā)布時(shí)間: 2020-04-13  點(diǎn)擊次數(shù): 2140次
   內(nèi)切酶一般從微生物中獲取,限制性核酸內(nèi)切酶的作用實(shí)際就是限制酶降解外源DNA,維護(hù)宿主遺傳穩(wěn)定的保護(hù)機(jī)制。自身DNA沒有被分解的原因是通過自身DNA甲基化,甲基化是常見的修飾作用,可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保護(hù),即讓它們?cè)诩谆D(zhuǎn)移酶的作用下,與甲基發(fā)生共價(jià)結(jié)合。通過甲基化作用達(dá)到識(shí)別自身遺傳物質(zhì)和外來遺傳物質(zhì)的目的。
  限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別序列的結(jié)構(gòu)情況:
  根據(jù)限制酶的結(jié)構(gòu),輔因子的需求切位與作用方式,可將限制酶分為三種類型,分別是第①型(Type I)、第②型(TypeⅡ)及第③型(TypeⅢ)。
  Type I:
  同時(shí)具有修飾及識(shí)別切割的作用;另有識(shí)別DNA上特定堿基序列的能力,通常其切割位距離識(shí)別位可達(dá)數(shù)千個(gè)堿基之遠(yuǎn)。
  TypeⅡ:
  Ⅱ類中的限制性內(nèi)切酶在分子克隆中得到了廣泛應(yīng)用,它們是重組DNA的基礎(chǔ)。
  只具有識(shí)別切割的作用,修飾作用由其他酶進(jìn)行。所識(shí)別的位置多為短的回文序列;所剪切的堿基序列通常即為所識(shí)別的序列。是遺傳工程上,實(shí)用性較高的限制酶種類。
  Ⅱ類酶切割位點(diǎn)在識(shí)別序列中,有的在對(duì)稱軸處切割,產(chǎn)生平末端的DNA片段;有的切割位點(diǎn)在對(duì)稱軸一側(cè),產(chǎn)生帶有單鏈突出末端的DNA片段稱粘性末端,如EcoRⅠ切割識(shí)別序列后產(chǎn)生兩個(gè)互補(bǔ)的粘性末端。
  TypeⅢ:
  與一型限制酶類似,同時(shí)具有修飾及識(shí)別切割的作用??勺R(shí)別短的不對(duì)稱序列,切割位與識(shí)別序列約距24-26個(gè)堿基對(duì)。
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